ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТАТА ХИТОЗАНА, ПРИГОДНОГО ДЛЯ ОСТАНОВКИ ВНУТРИПОЛОСТНЫХ КРОВОТЕЧЕНИЙ

БИОТЕХНОЛОГИЯ, 2024, том 40, № 3, с. 88–94

ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТАТА ХИТОЗАНА, ПРИГОДНОГО
ДЛЯ ОСТАНОВКИ ВНУТРИПОЛОСТНЫХ КРОВОТЕЧЕНИЙ
© 2024 г. М. В. Волкова1, 2, *, А. М. Носов3, К. П. Головко3, В. А. Мацура1,
К. Н. Демченко3, А. Я. Ковалевский3, Я. Б. Ковалевский1
1ООО Химическая компания “Орион”, Санкт-Петербург, 192148 Россия
2ФГАОУ ВО “Московский физико-технический институт (национальный
исследовательский университет)”, Долгопрудный, 141701 Россия
3ФГБВОУ ВО “Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова”, Санкт-Петербург, 194044 Россия
*e-mail: This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.
Поступила в редакцию 12.04.2024 г.
После доработки 30.05.2024 г.
Принята к публикации 06.06.2024 г.
Проведена сравнительная оценка показателей водопоглощения и гемостатической активности геля
лактата хитозана in vitro. Получение соли хитозана подтверждено ИК-спектрофотометрией и термогравиметрическим анализом. Гемостатическая активность геля лактата хитозана подтверждена экспериментами in vitro. Осуществлена корреляция результатов, полученных in vitro с опубликованными ранее предварительными результатами по остановке внутриполостных кровотечений in vivo.
Ключевые слова: хитозан, гель, медицинское изделие, гемостатическая активность, первая помощь
DOI: 10.56304/S0234275824030098
В современном мире риск техногенных и природных катастроф, террористических атак и локальных столкновений остается высоким. Таким
образом, неконтролируемое кровотечение, возникающее в результате травм и повреждений
внутренних органов, по-прежнему остается основной причиной смерти. Своевременная остановка кровотечения является первым шагом в
оказании медицинской помощи для спасения
жизни и предотвращения развития осложнений
[1, 2]. Особенно остро стоит проблема абдоминальных кровотечений, остановку которых осуществляют только при хирургическом вскрытии
полости в условиях стационара. Опасность этого
типа кровотечений заключается в том, что они
могут длиться от нескольких минут до нескольких часов в зависимости от времени догоспитального периода и транспортировки пострадавшего
[3]. В случае продолжающегося кровотечения вероятность сохранения жизни и благоприятного
исхода лечения напрямую зависит от сроков оказания медицинской помощи, — как можно более
раннего и полноценного гемостаза.
Одним из способов остановки массивных внутриполостных кровотечений на догоспитальном
этапе является применение пенополиуретанов, которые могут быстро расширяться и таким образом
блокировать рану. Эти соединения обладают низкой водопоглощающей способностью, поэтому гемостаз достигается исключительно под действием
создаваемого ими давления и коагуляционного
каскада крови пациента [4]. Несмотря на эффективность этой технологии, использование пенополиуретанов может привести к осложнениям.
Сильное давление на сосуды может нарушить работу сердца и кровоснабжение тканей [3]. Данных
о других средствах для остановки внутрибрюшного кровотечения на этапе оказания первой помощи нами не обнаружено.
Разработано и зарегистрировано большое количество кровоостанавливающих материалов на
основе хитозана, каолина, цеолитов и других. Преимущественно они представлены в сухом виде,
например, в виде порошков, бинтов и губок и
предназначены для кровоточащих конечностей
или открытых ран [5, 6]. Применение этих препаратов на паренхиматозных органах требует хирургической операции, которая невозможна на этапе
эвакуации [7]. При оказании первой помощи на
догоспитальном этапе при брюшном кровотечении необходимо введение кровоостанавливающего
средства путем простого вмешательства, например,
Список сокращений: ТГА – термогравиметрический анализ;
МТТ – метилтиазолилдифенил-тетразолия бромид; FTIR –
инфракрасная спектроскопия Фурье; OD – оптическая
плотность.
УДК 612.116.21+66.091

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ГЕЛЯ ЛАКТАТА ХИТОЗАНА 89
через небольшой прокол брюшной полости после
предварительной диагностики и при подозрении
на наличие такого кровотечения. Ввиду того, что
неизвестно точное место кровотечения, использование сухого продукта невозможно, так как он
с высокой долей вероятности, не достигнет места
кровотечения. На наш взгляд, наиболее перспективным для этих целей является кровоостанавливающий препарат в форме геля на основе хитозана. Преимуществами гемостатического геля является возможность его инъекционного введения,
кроме того, он полностью заполняет глубокие и раны сложной формы [2]. При абдоминальном введении гелевая форма обеспечит равномерное распределение кровоостанавливающего средства и
гарантирует достижение хитозаном места повреждения и остановку кровотечения.
Ранее были проведены исследования по безопасности и эффективности применения геля на
основе хитозана для остановки внутриполостного
кровотечения [8–10]. Цель данной статьи охарактеризовать этот гемостатический гель и связать
его физико-химические и биохимические характеристики in vitro с результатами in vivo, опубликованными ранее.
УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА
1. Синтез лактата хитозана
Порошок хитозана (молекулярная масса около
500 кДа, степень деацетилирования 90–92%, (Jinan Refine Chemical Co., Ltd., Китай) загружали в
80%-ный этанол, затем добавляли молочную кислоту в соотношении 1 : 1. Смесь нагревали до 40°С
и при перемешивании выдерживали в течение 3 ч.
Затем смесь охлаждали и фильтровали. Светложелтый продукт промывали 80%-ным этанолом и
сушили в вакуумном шкафу при 50°С.
2. Определение степени замещения
Степень замещения аминных групп в лактате
хитозана оценивали титрованием избытка молочной кислоты, остающегося после реакции синтеза соли. Избыток молочной кислоты определяли
в суммарном фильтрате при промывке готовой
соли. В типовом эксперименте 1 г промывного раствора смешивали с 100 мл этанола и добавляли индикатор (фенолфталеин). Полученный раствор титровали стандартным раствором гидроксида калия
до достижения точки эквивалентности, фиксируемой изменением цвета индикатора. По объему
раствора КОН рассчитывали количество оставшейся после синтеза молочной кислоты. Затем рассчитывали степень замещения, исходя из молекулярной массы одного фрагмента хитозана и степени
дезацетилирования.
3. Водопоглощение
Порошок лактата хитозана массой 1 ± 0.05 г
помещали в чашку Петри. Затем осторожно по каплям добавляли 100 мл воды и инкубировали при
комнатной температуре 5 мин. Порошок без перемешивания набирает ограниченное количество
воды и только через 8 ч формирует равномерный
гель во всем объеме добавленной жидкости. После
инкубации избыточный объем жидкости аккуратно
удаляли, а чашку Петри с гелем взвешивали. Водопоглощение рассчитывали по формуле:
где m0 – масса образца, m1 – масса образца после
инкубации с водой.
4. ИК-спектрометрия
Инфракрасные спектры регистрировали на приборе Irafinity-1 (Shimadzu, Япония) с преобразованием Фурье (FTIR). Образцы прессовали на KBr
с массовым соотношением 1 : 80. Сканирования
проводили от 400 до 4000 см–1.
2.6. Термогравиметрический анализ
Термогравиметрический анализ (ТГА) проводили на приборе DTG-60AH (Shimadzu, Япония).
Образец порошка лактата хитозана сканировали
от 0 до 500°С при скорости нагрева 5°С/мин в токе азота.
5. Цитотоксичность
Цитотоксичность порошка лактата хитозана
оценивали с помощью МТТ-теста. Линию клеток
NIH 3T3 (ATCC® CRL-1658TM, “Биолот”, Россия) культивировали в среде DMEM (Gibco®,
США), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco®,) и раствор пенициллина и стрептомицина (“ПанЭко”, Россия). Клетки высевали в
96-луночный планшет в концентрации 5 × 103 клеток на лунку и инкубировали в течение 24 ч при
37°С и 5% CO2 в инкубаторе S-Bt Smart BioTerm
(Biosan, Латвия). Порошок лактата хитозана стерилизовали под ультрафиолетом, а затем растворяли в питательной среде в диапазоне концентраций от 0.3 до 5.0 мг/мл. Через сутки питательную
среду клеток заменяли свежей (контрольной) или
средой с растворенной солью хитозана. Клетки
культивировали в течение 48 ч, затем во всех лунках среду заменяли на свежую среду с добавлением
0.5 мг/мл МТТ (Sigma-Aldrich, США), инкубировали 4 ч при 37°С. Затем среду с МТТ удаляли и в каждую лунку добавляли по 200 мкл диметилсульфоксида (Servicebio Technology, Китай). Оптическую
плотность растворов в каждой лунке определяли

при длине волны 560 нм с вычетом фонового по
глощения при длине волны 650 нм с помощью
планшетного спектрофотометра Clariostar Plus
(BMG LABTECH, Германия). Оценку метаболиче

четы производили относительно образца эритро
цитарной массы, подготовленного тем же спосо
бом. Максимальную мощность рассчитывали по
формуле:

ской активности клеток рассчитывали по формуле: OD
% R =	100, ×

где OD – оптическая плотность при длине волны
560–650 нм.
6. Тест на свертываемость цельной крови in vitro
Для экспериментов in vitro использовали свиную
кровь. Работа с животными проводилась в соответствии с международными рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных. Протокол исследования одобрен комиссией по биоэтике Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова
(протокол от 23 ноября 2021 г. № 256).
Для эксперимента использовали цельную кровь
свиньи, содержащую антикоагулянт (3.8% цитрат
натрия : кровь 1 : 9). Перед добавлением активировали кровь 0.1 М хлорида кальция (1 : 10). К
образцу порошка массой 20.0 ± 0.5 мг добавляли 0.3 мл активированной крови, инкубировали
3 или 10 мин при 37°С и перемешивании со скоростью 150 об/мин в шейкере-инкубаторе ES-20/80
(Biosan). Затем к суспензии осторожно добавляли
1.7 мл деионизованной воды. Жидкую фракцию собирали и разбавляли в два раза. В качестве контроля
использовали активированную кровь без добавления гемостатика, которую инкубировали и разбавляли аналогичным образом. Поглощение растворов
определяли при длине волны 540 нм с помощью
спектрофотометра Clariostar Plus (BMG LABTECH).
Расчеты проводили относительно образца крови,
приготовленного аналогичным образом, но без инкубирования (ODкровь). Поглощение эритроцитов
рассчитывали по формуле:
где OD – значение оптической плотности при
540 нм.
7. Теоретическая максимальная способность
к адсорбции клеток крови
К навеске порошка массой 25.0 ± 2.0 мг (mобразец)
добавляли 0.5 мл эритроцитарной массы. Инкубировали 10 мин при 37°С и перемешивании со
скоростью 150 об/мин в шейкере-инкубаторе
ES-20/80 (Biosan). К суспензии осторожно добавляли 8.5 мл деионизованной воды. Жидкую фракцию собирали и разбавляли в пять раз. Поглощение
растворов определяли при длине волны 540 нм с
помощью спектрофотометра Clariostar Plus. Рас-
( ) образец
контроль
OD

( )
Г % 100
= -

образец
кровь
100,
OD
×

OD
где Г – поглощение эритроцитов (см. п. 5).
8. Приготовление гелей
Порошок лактата хитозана стерилизовали излучением 17 кГр. Для получения 100 г 5%-ного геля навеску лактата хитозана массой 5 г помещали
в колбу и добавляли 95 г дистиллированной воды
при интенсивном перемешивании. Растворение
проводили при комнатной температуре.
9. Вязкость и плотность геля
Вязкость геля определяли с помощью ротационного вискозиметра Viscolead ONE L (Fungilab,
Испания) согласно инструкции производителя.
Плотность геля определяли по стандартной методике с использованием набора ареометров.
10. Статистика
При оценке стерильности геля и в МТТ-тесте
было не менее трех повторностей для экспериментального образца. Во всех экспериментах с
кровью in vitro и оценкой водопоглощения было
проведено пять измерений. Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью
программы Statistica 7.0 (StatSoft Inc., США).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Хитозан обладает хорошей биосовместимостью, биоразлагаемостью, антибактериальной активностью и гемостатическими свойствами [11].
Химическая модификация хитозана позволяет модулировать физико-химические характеристики,
антибактериальные и клеточно-адгезивные свойства полученного материала [12]. Для приготовления геля необходимо водорастворимое производное хитозана. В частности, производные хитозана, такие как лактат, способны растворяться в воде,
тогда как хитозан растворим только в 1%-ном растворе кислоты. На основе лактата хитозана разрабатываются различные препараты для заживления ран [13]. Однако нами обнаружено лишь несколько работ, посвященных его гемостатической
активности [7, 13, 14]. Наши исследования дополняют информацию о возможности использования лактата хитозана в качестве кровоостанавливающего средства.

В сухом виде этот материал представляет собой
однородный мелкодисперсный порошок светлобежевого цвета, который является основным компонентом геля. Степень замещения аминогрупп
исходного хитозана составляет 83 ± 5%. Порошок
был охарактеризован в первую очередь, так как
именно он обуславливает все характеристики применяемого медицинского препарата.
Характеристика водопоглощения in vitro коррелирует со способностью гемостатических изделий поглощать экссудат и концентрировать клетки крови для ускорения коагуляции. Поэтому медицинские средства для остановки кровотечений
должны обладать хорошей водопоглощающей способностью [15]. По литературным данным, материалы, способные поглощать более 20 г на 1 г сухого
вещества, обладают гемостатическими свойствами [16].
Оценка водопоглощающей способности показала, что 1 г порошка может абсорбировать 55 ± 2 г воды. Следовательно, лактат хитозана пригоден для
абсорбции жидкости и концентрации клеток крови для достижения быстрого гемостаза [17].
В спектре исходного хитозана наблюдается несколько характерных пиков при 3360, 2919, 2874,
1640, 1592, 1375, 1153, 1061 и 893 см–1 [18] (рис. 1).
Тест FTIR использовали для оценки функциональных групп, присутствующих в лактате хитозана. В спектрах лактата хитозана наблюдаются
широкие пики в диапазоне 3400–3200 см–1. Пики
были отнесены к растяжению OH, что указывает
на межмолекулярные водородные связи и валентные связи NH. Полосы поглощения около 2980 и
2883 см–1 можно отнести к симметричному и асимметричному растяжению CH соответственно. Эти
полосы характерны для полисахаридов и встречаются в спектрах других полисахаридов, таких как
ксиланы [19], глюканы [20] и каррагинаны [21].
Наличие остаточных N-ацетильных групп подтверждено небольшими полосами при около 1660 см–1
(C=O-растягивание амида) и 1317 см–1 (C-N-растягивание амида) соответственно. Небольшая полоса при 1550 см–1, соответствует N-H-изгибу амида, а при 1570 см–1 относится к протонированным
аминогруппам соли хитозана [22]. Наличие большого количества протонированных аминогрупп
четко видно на ИК-спектре полученного производного, что подтверждает получение соли хитозана.
Изгиб CH2 и симметричные деформации CH3
были подтверждены наличием полос около 1456 и
1379 см–1 соответственно. Полосу поглощения при
1149 см–1 можно отнести к асимметричному растяжению мостика С–О–С. Полосы 1066 и 1026 см–1
соответствуют растяжению С–О. Этот сигнал при
1260 см-1 был отнесен к деформационным колебаниям гидроксилов, присутствующих в хитозане
[23]. Сигнал при 896 см–1 соответствует выходу СН
из плоскости кольца моносахаридов.

Предварительные эксперименты по исследованию безопасности и эффективности применения геля лактата хитозана на экспериментальных
моделях были представлены в ранних публикациях.
В эксперименте на кроликах [8] при внутрибрюшном введении 5% геля лактата хитозана установлено
отсутствие токсических эффектов на внутренние
органы животных. Следовательно, умеренная цитотоксичность, определенная in vitro, с высокой
долей вероятности, обусловлена именно изменением физического параметра.
Демонстрация эффективности разработанного гемостатического средства была проведена на
специально разработанной модели [10]. Как правило, подобные исследования гемостатиков проводят на модели повреждения печени у животных
после лапаротомии путем нанесения средства непосредственно на место травмы, например, как в публикации [6]. Наш эксперимент отличался тем, что
после нанесения травмы, живот зашивали, а введение гемостатического геля осуществляли “вслепую”, а именно в проекцию печеночно-почечного и почечно-селезеночного пространства. Такая
постановка эксперимента позволила оценить перспективы использования геля на основе хитозана в
качестве средства первой помощи, когда осуществление лапаротомии и остановка внутрибрюшного
кровотечения невозможна. При такой постановке исследования определено, что введение геля увеличивает выживаемость животных с 60 до 100%, а
также повышает шансы полной остановки кровотечения с 33 до 100% [10].
Для проведения дальнейших работ по определению гемостатической эффективности геля хитозана в экспериментах in vivo необходимо было
подробно исследовать его физико-химические
свойства в системе in vitro с использованием эритроцитов крови животных.
Результаты проведенных исследований подтвердили высокую водопоглощающую способность
(свыше 50 г/г сухого вещества) 5% гемостатического геля лактата хитозана, которая превышает
гемостатическую емкость, не менее, чем на 20%.
Таким образом, гель может быть использован для
введения в брюшную полость с целью остановки
внутренного кровотечения без лапаротомии.
ФИНАНСИРОВАНИЕ:
Работа выполнена при поддержке Министерства
науки и высшего образования Российской Федерации
по программе “Приоритет-2030”.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Chen Y., Wu L., Li P., Hao X., Yang X., Xi G., Liu W.,
Feng Y., He H., Shi C. Polysaccharide based hemostatic
strategy for ultrarapid hemostasis. Macromol. Biosci.,
2020, 20(4), 1900370.
https://doi.org/10.1002/mabi.201900370
2. Liu C., Liu C., Liu Z., Shi Z., Liu S., Wang X., Wang X.,
Huang F. Injectable thermogelling bioadhesive chitosan-based hydrogels for efficient hemostasis. Int. J.
Biol. Macromol., 2023, 224, 1091–1100.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2022.10.194
3. Velmahos G. C., Spaniolas K., Duggan M., Alam H.B.,
Tabbara M., De Moya M., Vosburgh K. Abdominal insufflation for control of bleeding after severe splenic injury. J. Trauma Acute Care Surg., 2007, 63(2), 285–290.
https://doi.org/10.1097/TA.0b013e3180d0a6ea
4. Yang X., Liu W., Shi Y., Xi G., Wang M., Liang B., Feng Y.,
Ren X., Shi C. Peptide-immobilized starch/PEG
sponge with rapid shape recovery and dual-function for
both uncontrolled and noncompressible hemorrhage.
Acta Biomater., 2019, 99, 220–235.
https://doi.org/10.1016/j.actbio.2019.08.039
5. Khan M.A., Mujahid M. A review on recent advances in
chitosan-based composite for hemostatic dressings. Int.
J. Biol. Macromol., 2019, 124, 138–147.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.11.045
6. Deineka V., Sulaieva O., Pernakov N., Radwan-Praglowska J., Janus L., Korniienko V., Husak Y., Yanovska A.,
Liubchak I., Yusupova A., Pgtkowski M., Zlatska A.,
Pogorielov M. Hemostatic performance and biocompatibility of chitosan-based agents in experimental parenchymal bleeding. Mater. Sci. Eng. C., 2021, 120, 111740.
https://doi.org/10.1016/j.msec.2020.111740
7. Jiang Y., Tang X., Li T., Ling J., Ge Y., Yang Y. Chitosan
Lactate Particles for Non-Compression Hemostasis on
Hepatic Resection. Polymers, 2023, 15(3), 656.
https://doi.org/10.3390/polym15030656
8. Ковалевский А.Я., Носов А.М. Остановка продолжающегося внутрибрюшного кровотечения перспективными местными биосовместимыми гемостатическими средствами. Известия Российской Военномедицинской академии. 2022, 41(2), 187–194.
https://doi.org/10.17816/rmmar104689
9. Головко К.П., Самохвалов И.М., Гришин М.С., Носов А.М., Юдин А.Б., Ковалевский А.Я., Багненко А.С.,
Ковалишин И.М. Применение местного гемостатического средства на основе хитозана для контроля
внутрибрюшного кровотечения. Вестник Российской
военно-медицинской академии. 2022, 24(1), 43–54.
https://doi.org/10.17816/brmma91155
10. Головко К.П., Носов А.М., Юдин А.Б., Самохвалов И.М.,
Демченко К.Н., Пичугин А.А., Ковалевский А.Я.
Местное гемостатическое средство в виде геля на
основе хитозана – перспективная методика остановки продолжающегося внутрибрюшного кровотечения (экспериментальное исследование). Вестник
Российской Военно-медицинской академии, 2024, 1,
61–70. https://doi.org/10.17816/brmma562796
11. Rinaudo M. Chitin and chitosan: Properties and applications. Prog. Polym. Sci., 2006, 31(7), 603–632.
https://doi.org/10.1002/9781119450467
12. Zhu Y., Zhang Y., Zhou Y. Application progress of modified chitosan and its composite biomaterials for bone
tissue engineering. Int. J. Mol. Sci., 2022, 23(12), 6574.
https://doi.org/10.3390/ijms23126574
94
БИОТЕХНОЛОГИЯ том 40 № 3 2024
ВОЛКОВА и др.
13. Pieklarz K., Galita G., Tylman M., Maniukiewicz W.,
Kucharska E., Majsterek I., Modrzejewska Z. Physicochemical properties and biocompatibility of thermosensitive chitosan lactate and chitosan chloride hydrogels developed for tissue engineering application.
J. Funct. Biomater., 2021, 12(2), 37.
https://doi.org/10.3390/JFB12020037
14. Madni A., Khan R., Ikram M., Naz S.S., Khan T., Wahid F.
Fabrication and characterization of chitosan–vitamin c–
lactic acid composite membrane for potential skin tissue
engineering, Int. J. Pol. Sci., 2019, 2019(1), 4362395.
https://doi.org/10.1155/2019/4362395
15. Zahedi P., Rezaeian I., Ranaei-Siadat S.O., Jafari S.H.,
Supaphol P. A review on wound dressings with an emphasis on electrospun nanofibrous polymeric bandages.
Polymer. Advan. Technol., 2010, 21(2), 77–95.
https://doi.org/10.1002/pat.1625
16. Li B., Wang J., Gui Q., Yang H. Continuous production
of uniform chitosan beads as hemostatic dressings by a
facile flow injection method. J. Mater. Chem. B., 2020,
8(35), 7941–7946.
https://doi.org/10.1039/D0TB01462A
17. Wei X., Ding S., Liu S., Yang K., Cai J., Li F., Wang C.,
Lin S., Tian F. Polysaccharides-modified chitosan as
improved and rapid hemostasis foam sponges. Carbohydr. Polym., 2021, 264, 118028.
https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2021.118028
18. Domszy J.G., Roberts G.A.F. Evaluation of infrared
spectroscopic techniques for analysing chitosan. Die
Makromolekulare Chemie: Macromol. Chem. Phys.,
1985, 186(8), 1671–1677.
https://doi.org/10.1002/macp.1985.021860815
19. Melo-Silveira R.F., Fidelis G.P., Costa M.S.S.P., Telles C.B.S.T., Dantas-Santos N., de Oliveira Elias S., Ribeiro V.B., Barth A.L., Macedo A.J., Leite A.L., Rocha H.A.O. In vitro antioxidant, anticoagulant and antimicrobial activity and in inhibition of cancer cell
proliferation by xylan extracted from corn cobs. Int.
J. Mol. Sci., 2011, 13(1), 409–426.
https://doi.org/10.3390/ijms13010409
20. Wolkers W.F., Oliver A.E., Tablin F., Crowe J.H. A Fourier-transform infrared spectroscopy study of sugar
glasses. Carbohydr. Res., 2004, 339(6), 1077–1085.
https://doi.org/10.1016/j.carres.2004.01.016
21. Silva F.R.F., Dore C.M.P.G., Marques C.T., Nascimento M.S., Benevides N.M.B., Rocha H.A.O., Chavante S.F., Leite E.L. Anticoagulant activity, paw edema
and pleurisy induced carrageenan: Action of major
types of commercial carrageenans. Carbohydr. Polym.,
2010, 79(1), 26–33.
https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2009.07.010
22. Lim S.H., Hudson S.M. Synthesis and antimicrobial activity of a water-soluble chitosan derivative with a fiberreactive group. Carbohydr. Res., 2004, 339(2), 313–319.
https://doi.org/10.1016/j.carres.2003.10.024
23. Song C., Yu H., Zhang M., Yang Y., Zhang G. Physicochemical properties and antioxidant activity of chitosan
from the blowfly Chrysomya megacephala larvae. Int.
J. Biol. Macromol., 2013, 60, 347–354.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.05.039
24. Kumar S., Koh J. Physiochemical, optical and biological activity of chitosan-chromone derivative for biomedical applications. Int. J. Mol. Sci., 2012, 13(5),
6102–6116.
https://doi.org/10.3390/ijms13056102
25. Tripathi A., Melo J.S. Preparation of a sponge-like biocomposite agarose–chitosan scaffold with primary hepatocytes for establishing an in vitro 3D liver tissue
model. RSC Advances, 2015, 5(39), 30701–30710.
https://doi.org/10.1039/c5ra04153h
26. Chou T.C., Fu E., Wu C.J., Yeh J.H. Chitosan enhances
platelet adhesion and aggregation. Biochem. Biophys.
Res. Commun., 2003, 302 (3), 480–483.
https://doi.org/10.1016/S0006-291X(03)00173-6
27. Gustafson S.B., Fulkerson P., Bildfell R., Aguilera L.,
Hazzard T.M. Chitosan dressing provides hemostasis in
swine femoral arterial injury model. PHEM, 2007,
11(2), 172–178.
https://doi.org/10.1080/10903120701205893
Characteristics of Chitosan Lactate Suitable for Stopping Intracavitary Bleeding
M. V. Volkovaa, b, #, A. M. Nosovc, K. P. Golovkoc, V. A. Matsuraa,
K. N. Demchenkoc, A. Ya. Kovalevskyc, and Ya. B. Kovalevskya
aChemical company “Orion”, St. Petersburg, 192148 Russia
bMoscow Institute of Physics and Technology, Dolgoprudny, 141701 Russia
cMilitary Medical Academy named after C.M. Kirov, St. Petersburg, 194044 Russia
#e-mail: This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.
Abstract–A comparative assessment of the water absorption and hemostatic activity of chitosan lactate gel in vitro
was carried out. IR spectrophotometry and thermogravimetric analysis confirmed the production of chitosan
salt. The hemostatic activity of chitosan lactate gel was confirmed by in vitro experiments. The results obtained
in vitro were correlated with previously published preliminary results on stopping intracavitary bleeding in vivo.